Sviluppo di un database per l’identificazione di Borrelia spp. mediante spettrometria di massa MALDI-TOF.

Le borrelie sono batteri gram-negativi microaerofili a lenta crescita trasmessi all'uomo mediante il morso di un artropode vettore. Il complesso Borrelia burgdorferi sensu lato comprende gli agenti eziologici di Borreliosi di Lyme (LB), una malattia sistemica trasmessa all'uomo dal morso di una zecca dura. In Europa le specie responsabili della LB sono: B. burgdorferi sensu stricto (ss), B. afzelii e B. garini. In questo studio la spettrometria di massa con tecnologia MALDI-TOF è stata applicata all’identificazione di borrelie per l’implementazione del database dello strumento in uso nel nostro laboratorio, già comprendente le specie Borrelia burgdorferi ss, B. garini e B. spielmanii, con B. afzelii, unica specie mancante delle tre agenti eziologici di LB in Europa. Sono stati inoltre inclusi nello studio 3 ceppi di riferimento appartenenti alle specie B. hermsii, responsabile di febbre ricorrente in Nord America, B. japonica, circolante in Asia, e B. burgdorferi ss (B31) per rendere più accurate future applicazioni volte all’identificazione di borrelie. E' stato inoltre possibile verificare l'efficacia del database creato identificando un ceppo di isolamento clinico (UCSC) precedentemente caratterizzato mediante studi biochimici e molecolari come B. burgdorferi ss. L'analisi mediante MALDI-TOF MS ha prodotto per 3 dei ceppi di riferimento analizzati (B. afzelii, B. hermsii e B. japonica) un profilo proteico specifico non riconducibile a nessuno dei profili presenti nel database dello strumento. Il profilo proteico ottenuto dal ceppo di riferimento B. burgdorferi ss (B31) è stato correttamente associato a quello del ceppo di B. burgdorferi ss già presente nel database, così come per il ceppo di isolamento clinico UCSC. Infine, dagli spettri ottenuti mediante MALDI-TOF è stato possibile creare un dendrogramma che riflette la separazione delle specie appartenenti al complesso Borrelia burgdorferi sensu lato da B. hermsii che si posiziona in un gruppo separato. I risultati riportati in questo studio dimostrano che la tecnologia MALDI-TOF MS è utile sia a fini diagnostici per il rilevamento e l'identificazione di specie di Borrelia sia a scopo epidemiologico per la eventuale realizzazione di strategie di sorveglianza.