Valutazione di due saggi di real-time PCR per la diagnosi di laboratorio di malaria da Plasmodium ovale wallikeri e Plasmodium knowlesi.

Un'accurata diagnosi di laboratorio di malaria nei Paesi non endemici è di fondamentale importanza per instaurare una terapia mirata con esito positivo sulla salute del paziente. La malaria, non più endemica in Italia, è la malattia di importazione a più importante impatto epidemiologico nel nostro Paese, secondo solo a Francia, Regno Unito e Germania, con una prevalenza del 23% nel nostro laboratorio. Metodi molecolari basati sul 18S-rDNA dei plasmodi si sono rivelati altamente sensibili e specifici per la diagnosi di laboratorio di malaria; di conseguenza l'epidemiologia è cambiata mostrando sia una maggiore prevalenza delle infezioni causate da specie diverse da P. falciparum (P. ovale, P. vivax e P. malariae) sia di infezioni miste sottovalutate dall'indagine microscopica, tutt'ora metodo di riferimento. Inoltre, studi di sequenza hanno evidenziato un polimorfismo genetico nel 18S-rDNA di P. ovale, rilevato successivamente anche in altri geni, che ha portato alla descrizione di due distinte specie di P. ovale (P. ovale curtisi e P. ovale wallikeri) non distinguibili mediante esame microscopico. Infine, saggi molecolari recentemente descritti hanno rivelato anche nell'uomo infezioni da P. knowlesi, agente eziologico di malaria nel macaco del Sud Est Asiatico e morfologicamente indistinguibile da P. malariae. In questo studio retrospettivo abbiamo valutato due saggi di Real-Time PCR aventi come bersaglio il 18S-rDNA per la rivelazione di P. ovale wallikeri (Pow-RtPCR), distinguendolo da P. ovale curtisi (Poc-RtPCR), e di P. knowlesi (Pk-RtPCR), utilizzando 398 campioni di sangue tra quelli pervenuti presso il nostro laboratorio da pazienti con sospetta malaria, a confronto con l'esame microscopico. I due nuovi saggi hanno rivelato un'eccellente sensibilità analitica e nessuna reattività crociata verso il DNA delle specie P. falciparum, P. vivax e P. malariae e verso quello di altri protozoi quali Toxoplasma gondii e Leishmania infantum dimostrandosi indispensabili per un'accurata e completa diagnosi dei casi di malaria d’importazione. Pertanto questi nuovi saggi sono stati inclusi nel pannello dei saggi molecolari utilizzati nel nostro laboratorio per la diagnosi di malaria.