Confronto tra due saggi di Real-Time PCR ed una Nested-PCR per la diagnosi di toxoplasmosi

Introduzione. In questo studio sono stati valutati due saggi di Real-time PCR ed un saggio di nested PCR per la diagnosi molecolared i toxoplasmosdi a applicaren ei casid ove la diagnosi sierologica potrebbe essere di difficile interpretazione. Metodi. Campionib iologici sperimentalmentea ddizionatid i tachizoiti di T.gondii coltivati in cellule VERO e opportunamente diluiti, sono stati utilizzati per valutare la sensibilità di due Real-time PCR ("TaqMan" e "FRET") e di una nested PCR, aventi come bersaglio una regione di 529 pb, ed i geni 18S RNA e BI di T.gondii, rispettivamente. La specificità è stata valutata sottoponendo agli stessi saggi DNA di Plasmodium spp., Cryptosporidium spp. e Leishmania infantum. Sono stati anche saggiatim edianten ested-PCR4 6 campioni biologici (16 liquidi arnniotici, 13 campioni di sangue, 7 liquor, 7 biopsie tissutali e una da linfonodo e 2 campioni di umor vitreo) di donne gravide o pazienti immunodepressi con sospettain fezione da T.gondii. Risultati. La sensibilità analitica è risultata 103 tachizoiti/ml (nested e Real-time PCR "TaqMan") e 102 tachizoiti/ml ("FRET"). Nessun segnale di PCR è stato osservato saggiando il DNA di Plasmodium spp., Cryptosporidium spp. e Leishmania infantum. Tre dei 46 campioni esaminati (2 liquor, I biopsia cerebrale) sono risultati positivi per la presenza del DNA di T.gondii. Conclusioni. I saggi di PCR valutati sono sensibili e specifici; in particolare, la FRET-PCR è risultata la più sensibile, probabilmente a causa del maggior numero di copie della sequenzab ersagliop resentin el DNA di T.gondii. I saggi di Real-time PCR sono di semplicee secuzionee forniscono risultati in tempi più brevi rispetto ai sistemi convenzionali di PCR, riducendo anche il rischio di contaminazione, rendendone così utile l'applicazione in campo diagnostico soprattutto nella nostra realtà in cui nel 2005 la prevalenzad ell'infezione da Toxoplasmag ondii rilevata su sieri di 3.997 soggetti è stata del 31.57%.