Introduzione. Indagini molecolari avanzate si stanno dimostrando sempre più utili nella diagnosi di infezione da microrganismi patogeni di interesse medico, quando opportunamente affiancate a quelle tradizionali, dirette (microscopia e coltura) e indirette (sierologia). Al fine di migliorare sensibilità, specificità ed efficacia dei saggi per la diagnosi di laboratorio di infezione da spirochete patogene è stato deciso di introdurre nel nostro laboratorio, reazioni di PCR per la rivelazione del DNA di Borrelia burgdorferi sensu lato, Leptospira spp. e Treponema pallidum, rispettivamente. Materiali e metodi. Sono state ampiamente valutate sensibilità, specificità ed efficacia dei tre saggi seguenti: il primo (nested-PCR in singolo tubo) allestito in casa per amplificare un frammento genico di Borrelia burgdorferi sensu lato; il secondo (nested-PCR “16SrRNA”) allestito in casa per amplificare un frammento genico di Leptospira spp.; il terzo (nested-PCR “Treponema pallidum <bmp>”, Amplimedical S.p.A.) saggio commerciale per amplificare un frammento del gene “bmp” che codifica per una proteina di membrana del batterio. Risultati e conclusioni. I saggi di PCR si sono tutti rivelati altamente sensibili, specifici ed efficaci. Il saggio nested- PCR in un singolo tubo potrà essere applicato sia nella diagnosi di laboratorio rapida di malattia di Lyme al fianco delle procedure tradizionali come l’esame colturale, lungo e indaginoso, e l’esame sierologico, poco sensibile e poco specifico, sia per escludere l’infezione in casi di sospetta borreliosi. Il saggio “16SrRNA” è risultato essere un efficace strumento diagnostico da applicare alla diagnosi di laboratorio di leptospirosi, specialmente durante i primi giorni dell’infezione quando altri saggi diagnostici risultano poco sensibili e poco specifici. Infine, il saggio “Treponema pallidum <bmp>”, data l’impossibilità di coltivare il batterio in vitro, può assumere un ruolo fondamentale nella diagnosi dei casi di lue nei quali le indagini sierologiche sono di dubbia interpretazione o non applicabili, sia per escludere l’infezione in casi sospetti.

DIAGNOSI DI LABORATORIO DI BORRELIOSI, LEPTOSPIROSI E SIFILIDE MEDIANTE METODI MOLECOLARI AVANZATI / Calderaro, Adriana; Piccolo, Giovanna; Bommezzadri, S.; Incaprera, M.; Zuelli, C.; Guegan, R.; Arcangeletti, Maria Cristina; Medici, Maria Cristina; Dettori, Giuseppe; Chezzi, Carlo. - In: MICROBIOLOGIA MEDICA. - ISSN 1120-0146. - 18:(2003), pp. 177-177. (Intervento presentato al convegno XXXII Congresso Nazionale della Associazione Microbiologi Clinici Italiani tenutosi a Firenze nel 14-17 Ottobre 2003).

DIAGNOSI DI LABORATORIO DI BORRELIOSI, LEPTOSPIROSI E SIFILIDE MEDIANTE METODI MOLECOLARI AVANZATI

CALDERARO, Adriana;PICCOLO, Giovanna;ARCANGELETTI, Maria Cristina;MEDICI, Maria Cristina;DETTORI, Giuseppe;CHEZZI, Carlo
2003-01-01

Abstract

Introduzione. Indagini molecolari avanzate si stanno dimostrando sempre più utili nella diagnosi di infezione da microrganismi patogeni di interesse medico, quando opportunamente affiancate a quelle tradizionali, dirette (microscopia e coltura) e indirette (sierologia). Al fine di migliorare sensibilità, specificità ed efficacia dei saggi per la diagnosi di laboratorio di infezione da spirochete patogene è stato deciso di introdurre nel nostro laboratorio, reazioni di PCR per la rivelazione del DNA di Borrelia burgdorferi sensu lato, Leptospira spp. e Treponema pallidum, rispettivamente. Materiali e metodi. Sono state ampiamente valutate sensibilità, specificità ed efficacia dei tre saggi seguenti: il primo (nested-PCR in singolo tubo) allestito in casa per amplificare un frammento genico di Borrelia burgdorferi sensu lato; il secondo (nested-PCR “16SrRNA”) allestito in casa per amplificare un frammento genico di Leptospira spp.; il terzo (nested-PCR “Treponema pallidum ”, Amplimedical S.p.A.) saggio commerciale per amplificare un frammento del gene “bmp” che codifica per una proteina di membrana del batterio. Risultati e conclusioni. I saggi di PCR si sono tutti rivelati altamente sensibili, specifici ed efficaci. Il saggio nested- PCR in un singolo tubo potrà essere applicato sia nella diagnosi di laboratorio rapida di malattia di Lyme al fianco delle procedure tradizionali come l’esame colturale, lungo e indaginoso, e l’esame sierologico, poco sensibile e poco specifico, sia per escludere l’infezione in casi di sospetta borreliosi. Il saggio “16SrRNA” è risultato essere un efficace strumento diagnostico da applicare alla diagnosi di laboratorio di leptospirosi, specialmente durante i primi giorni dell’infezione quando altri saggi diagnostici risultano poco sensibili e poco specifici. Infine, il saggio “Treponema pallidum ”, data l’impossibilità di coltivare il batterio in vitro, può assumere un ruolo fondamentale nella diagnosi dei casi di lue nei quali le indagini sierologiche sono di dubbia interpretazione o non applicabili, sia per escludere l’infezione in casi sospetti.
2003
DIAGNOSI DI LABORATORIO DI BORRELIOSI, LEPTOSPIROSI E SIFILIDE MEDIANTE METODI MOLECOLARI AVANZATI / Calderaro, Adriana; Piccolo, Giovanna; Bommezzadri, S.; Incaprera, M.; Zuelli, C.; Guegan, R.; Arcangeletti, Maria Cristina; Medici, Maria Cristina; Dettori, Giuseppe; Chezzi, Carlo. - In: MICROBIOLOGIA MEDICA. - ISSN 1120-0146. - 18:(2003), pp. 177-177. (Intervento presentato al convegno XXXII Congresso Nazionale della Associazione Microbiologi Clinici Italiani tenutosi a Firenze nel 14-17 Ottobre 2003).
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