STUDIO DEL PROCESSO DI MATURAZIONE ED ATTIVAZIONE DI FOSFOLIPASI A2 FUNGINE

TbSP1 (Tuber borchii secreted protein 1) è una fosfolipasi che si accumula nello strato interno della parete cellulare e nello spazio extracellulare in miceli, corpi fruttiferi e micorrize del fungo simbiotico T. borchii. Un’analisi dei livelli di mRNA di TbSP1 in funghi cresciuti in vivo in differenti condizioni nutrizionali ha evidenziato una regolazione in risposta alla disponibilità di nutrienti. In particolare, terreni carenti di carbonio o di azoto, inducono un significativo aumento nell’espressione di TbSP1. E’ stato precedentemente dimostrato che la proteina è in grado di attivarsi mediante auto rimozione della porzione N-terminale sia in vitro che in vivo. Il meccanismo del processo di digestione di TbSP1 è di tipo intermolecolare ed endoproteasico. Il sito proteasico è localizzato sul frammento di 14.5 kDa ed è distinto dal sito fosfolipasico. Nel presente lavoro di tesi viene descritta la caratterizzazione biochimica di TbSP1 con la determinazione dei parametri cinetici della reazione fosfolipasica così come delle costanti di affinità per il calcio di TbSP1. E’ stata inoltre analizzata l’importanza della presenza dello ione calcio in relazione alle due attività di TbSP1 e sono stati condotti esperimenti al fine di identificare i residui responsabili dell’attività proteasica. Inoltre, TbSP1 viene confrontata con altre fosfolipasi A2 fungine. In particolare è stata indagata la possibilità che due proteine da T. melanosporum e N. crassa, omologhe a TbSP1, abbiano lo stesso meccanismo di maturazione ed attivazione. Infine, viene analizzata l’attività fosfolipasica e l’eventuale capacità di digestione in trans di una forma stabile di TbSP1 da parte di alcune tra le principali PLA2 descritte in letteratura.