VALUTAZIONE DEL SAGGIO ENTEROVIRUS NUCLISENS EASYQ REAL-TIME NASBA SU CAMPIONI CLINICI

I metodi molecolari per la rivelazione di enterovirus (EV) in campioni clinici offrono il vantaggio rispetto al metodo colturale convenzionale di rivelare EV difficilmente o affatto coltivabili e di fornire i risultati nel giro di 24 ore; essi pertanto possono essere utili per il trattamento tempestivo del paziente. In questo studio è stato valutato il saggio Enterovirus NucliSens EasyQ Real-Time NASBA basato sull’impiego della tecnologia di amplificazione NASBA in associazione alla rivelazione mediante “molecular beacons” in tempo reale. Al saggio di specificità tutti i campioni clinici (3 feci e 2 secrezioni respiratorie) contenenti virus a RNA diversi da EV, hanno dato esito negativo mediante Real-Time NASBA. Il saggio di sensibilità, condotto mediante Real-Time NASBA in triplicato ed in tre giorni diversi su diluizioni seriali di RNA estratto da una sospensione fecale negativa per EV addizionata di una sospensione di virus ECHO 6 (concentrazione finale 105 TCID50/ml), ha dato costantemente esito positivo fino alla diluizione contenente 1 TCID50/ml di EV e meno costantemente rispetto all’nRT-PCR in presenza di 0,1 TCID50/ml. Impiegato su 45 campioni clinici (32 feci, 6 liquor, 7 secrezioni respiratorie), Real-Time NASBA ha dato esito concordante con l’nRT-PCR in 43 campioni (36 positivi e 7 negativi) e discordante in 2 campioni che sono risultati Real-Time NASBA negativi e nRT-PCR e/o esame colturale convenzionale positivi, rivelando una sensibilità del 94,7% e una specificità del 100%. Impiegato su 7 campioni del “QCMD EV Proficiency Programme 2002” contenenti EV a diverse concentrazioni, Real- Time NASBA ha concordato con l’esito positivo in 6 casi; al contrario ha dato esito negativo su un campione contenente 3,6 x 10-1 TCID50/ml. Grazie alla rapidità e semplicità di esecuzione (3 ore per il completamento della singola fase della Real- Time NASBA rispetto a 6 ore per le tre fasi dell’nRTPCR) oltre a buona specificità e sufficiente sensibilità, Enterovirus NucliSens EasyQ Real-Time NASBA si propone come una conveniente alternativa all’nRTPCR per la rivelazione di RNA di EV in tipi diversi di campioni clinici.